稀释法药敏试验是指将一定浓度的抗菌药物按照指南进行稀释后与肉汤或琼脂混合制成培养基，再接种受试菌株，经孵育培养后观察细菌生长情况，进行药敏结果分析。此法较少应用于临床检测，多用于罕见耐药的调查。在肉汤或琼脂中将抗菌药物进行一系列（对倍）稀释后，定量接种待检菌，35摄氏度孵育24小时后观察。抑制待检菌肉眼可生长的最低药物浓度，即为该药物对待检菌的最低抑菌浓度。

将一定浓度的抗菌药物稀释至不同浓度后接种受试菌株，通过测定菌株在不同浓度药物培养基内的生长情况可定量检测该药物的最低抗菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）、可抑制50%受试菌的MIC（MIC50）、可抑制90%受试菌的MIC（MIC90）。

稀释法药敏试验主要有试管肉汤稀释法、微量肉汤稀释法、琼脂稀释法等方法，其主要区别为培养基不同，但试验步骤基本一致。

1.药物稀释

按照美国临床和实验室标准协会（CLSI）制订的指南进行药物原液制备和稀释。

2.菌液制备

挑取培养好的受试菌制备成0.5麦氏单位菌悬液。

3.菌株接种

菌悬液配置完毕后15分钟内，按照试管肉汤稀释法和微量肉汤稀释法最终接种菌量为105CFU/ml，琼脂稀释法最终接种菌量为104CFU/点进行接种。

4.孵育培养

接种完毕后将培养基放入35℃培养箱中培养16~20小时。嗜血杆菌属、链球菌属培养时间为20~24小时，苯唑西林和万古霉素对葡萄球菌和肠球菌的培养时间为24小时。

5.结果分析

检查对照组生长情况，以肉眼或比浊剂观察读取所需数据。

1.保证抗菌药物质量

抗菌药物应直接从厂商或相关机构获取，实际浓度依据说明书进行换算，药品应按照说明书要求或于-20℃下干燥冷藏，制备好的药液应无菌并至少为-60℃冷冻保存，融化后应24小时内使用，未使用的不可再次使用。

2.培养基的要求

肉汤稀释法中，非苛养菌可选择阳离子调节的MH肉汤，对苛养菌中有特殊要求的如嗜血杆菌属、链球菌属可分别选择HTM培养基、含5%脱纤维马血CAMHB。琼脂稀释法中，一般选择MHA琼脂，特殊细菌如淋病奈瑟菌则用含1%生长因子的GC琼脂。检测葡萄球菌对苯唑西林、甲氧西林、萘夫西林的敏感性时，培养基中须含有最终浓度为2%的NaCl。

3.结果分析

如结果观察到跳孔现象应检查培养物纯度或重新进行试验。

药物最低浓度管无细菌生长者（对照管细菌生长良好），即为待检菌的最低抑菌浓度（MIC）。常规的稀释法药敏试验操作步骤繁琐，临床应用较少，多用于调查罕见耐药；调查药敏定性敏感而临床疗效不佳的原因；确定药敏定性中介的敏感性；选择二线药物；新药评价。商品化的微量稀释板操作方便，已广泛应用于临床，可指导药物剂量。