血液、体液、分泌物、粪便等宿主来源并包含病毒的物质称病料，病毒分离时，传代细胞系、原代细胞是常用的分离方法，动物接种、鸡胚接种必要时也可用于病毒分离。分离成功的病毒，首选细胞培养的方式进行扩增，动物、鸡胚和组织也可用于病毒扩增培养，培养后的纯病毒可用于鉴定、分型、感染特性和致病特性等研究。

不同病毒嗜好不同组织，相同病毒不同感染时期也有不同的组织和细胞分布，取材应结合病程和病情。常用标本有血液、咽洗液、鼻咽拭子、粪便、脑脊液、水疱液、眼洗液、结膜拭子等。

1.病程中期较早期和晚期易分离到病毒，病料采集时应适当考虑时间。

2.不同病毒在不同组织中含量不同，局部感染时可取部分组织或灌洗液，全身感染或隐匿感染时可取血液，中枢神经感染时取脑脊液。

3.样本留取时应尽量无菌，如因样本来源、操作等原因无法避免细菌污染时应对标本进行特殊处理。

4.标本需要尽快送检，如不能在1小时内送至检测机构需冻存于-20℃，转运时应避免反复冻融。

1.去除污染

粪便、鼻咽拭子及其他暴露在外环境中的标本，因携带细菌、真菌和其他病原体，接种前需进行特殊处理，首先对稀释后样本进行高速离心以去除固体沉淀和部分大分子物质，对离心后的上清添加适量抗生素和抗真菌药物以减少细菌和真菌的生长，最后采用合适孔径的滤膜过滤去除细菌等污染物获得病毒悬液。

2.样本处理和保存

首先将材料用无菌剪分成小块，置于无菌的碾钵内尽量磨碎，较软的脑、脊髓等组织可用匀浆器打碎，研磨完全后冻融1～3次，加适量生理盐水、磷酸盐缓冲盐水或病毒培养基并添加适量抗生素制成病毒悬液，离心后取上清，必要时还可用滤液接种敏感细胞，如不能及时接种，应添加防冻液置-80℃冰箱或液氮保存。

3.检验方法

（1）动物接种：动物活体对病毒的感染率取决于对该病毒是否敏感、病毒接种量、接种部位以及病毒毒力等因素。宿主为人类的病毒接种时最好选择进化最接近人的物种如猩猩、猕猴、狒狒等。由于经济、伦理等因素，实验室常用的动物多为大鼠、小鼠、豚鼠和小猪等。接种部位可分口服灌胃、皮下、腹腔、血管内和颅内注射等。

（2）鸡胚接种： 鸡胚由于分化程度相对较低，来源充足且造价经济常用于某些敏感病毒的培养，不同的病毒接种于不同的囊腔中，经过孵育后可获得大量病毒，常用于病毒的分离、培养、增毒、抗原和疫苗制备等。

（3）细胞培养：是病毒培养最常用的方法，根据病毒的细胞嗜性，选择合适的原代细胞或细胞系进行接种。培养时根据病毒的生长特性可添加适量的生长因子、血清、胰酶等物质。烈性病毒接种后的致细胞病变作用（CPE）可作为病毒感染细胞的直接观察指标，如CPE不明显，则需通过PCR（聚合酶链反应）、WB（蛋白印迹Western blotting）和IF（免疫荧光）等方法鉴定病毒是否感染细胞。适应了细胞培养的病毒生长良好，可进行连续传代。

4.病毒的鉴定

临床来源的病料在接种前通常会对病毒进行初步鉴定，常用方法包括ELISA（酶联免疫吸附试验）以及PCR测序等，获得纯培养的病毒则需要进行再次鉴定以确保病毒的正确性，常用PCR测序、IF和WB等。根据临床症状、标本来源及细胞病变等特性鉴定病毒具有较大的误差，病毒的核酸、蛋白作为鉴定依据较准确。

从病料中成功进行病毒的分离培养和鉴定是诊断病毒感染的“金标准”。虽然并不是所有病毒性疾病的诊断都需作病毒分离，但是若新疾病流行、血清学检测产生交叉反应、两种病毒无法区别，需进一步确诊且同一症状的疾病可能由多种病毒引起，则需要分离病毒。病毒的分离与鉴定对监测流行病的新动向、研究新疾病、新病毒以及疫苗的研发都有重要作用。