浓度梯度纸条扩散法药敏试验又称E-试验，是将受试菌株接种于琼脂平板培养基后加贴E-试验试纸条，孵育培养后根据说明书进行判读，并按照美国临床和实验室标准协会（CLSI）指南进行分析。此法结合了扩散法和稀释法的原理设计的浓度梯度药敏试验，可进行直接定量检测。可用于各种常见菌、苛养菌、分枝杆菌、厌氧菌和真菌等的药敏试验。尤其是酵母菌和霉菌的药敏试验是一项新的技术，由于影响因素较多，直接药敏试验较为困难，E试验法由于结果准确、稳定，受到广泛认同。

受试菌株接种于琼脂平版培养基后加贴E-试验试纸条，E-试验试纸条在琼脂上扩散，培养过夜后可见试纸条周围椭圆形抑菌圈，其边缘与试纸条交点的浓度刻度值即为受试菌的最低抑菌浓度（MIC）。E-试验试纸条是5mmX50mm的无孔试剂载体，一面为制备好的浓度呈连续梯度的抗菌药物，另一面为读数和刻度。抗菌药物梯度可覆盖20个MIC倍比稀释浓度范围，其斜率和浓度范围对判别有临床意义的MIC范围和折点有较好的相关性。

1.菌液制备

挑取已培养18~24小时的3~5个待测菌落，用无菌生理盐水配置成0.5麦氏浊度的菌悬液。

2.菌株接种

菌液接种应在菌液制备后15分钟内进行，用无菌棉蘸取菌液，并在试管壁上挤压除去多余菌液，均匀涂布整个水解酪蛋白（MH）平板（真菌选择MH+GMB平板）。重复2次，每次旋转平板60°，使整个平板表面均匀涂布，最后涂布平板四周边缘部分。涂布完成后室温干燥3~5分钟。

3.贴放试纸条

打开试纸条包装，用无菌镊或E-试验加样器夹取试纸条柄端，将其轻放于培养基表面，并保证纸条与培养基平面之间无气泡。

4.孵育培养

贴好试纸条后的培养基置于35℃空气环境下培养16~24小时。

观察孵育后平板上试纸条周围的抑菌圈，抑菌圈与试纸条横向相交处所对应的刻度即为该药对受试菌株的MIC。当无抑菌圈时，MIC应报告为大于读数刻度的最高值；当无交点时，MIC应报告为小于读数刻度的最低值。结果可按照CLSI指南进行解释。

1.抑菌圈与试纸条交点位于上下刻度之间时，取较高刻度值。

2.出现双层抑菌圈或抑菌圈和试纸条相交处出现散在菌落时取生长完全受抑制的抑菌圈对应刻度值。

3抑菌圈和试纸条相交处呈凹陷延伸时，应读取凹陷起始处对应的刻度值。

4.E-试验试纸条一旦贴放与平板不可再移动，并应保证试纸条与培养基之间没有气泡。

E-试验对各种耐药表型可有测量效果，且由于其具有精确的梯度、操作简单，可用于各种常见菌、苛养菌、真菌、分枝杆菌、诺卡菌及厌氧菌的药敏试验。此外，E试验的耐药性流行病学调查有助于建立有效的经验治疗。对大量使用抗生素的选药监测，对新抗生素的评价也有重要的指导价值。