寄生虫感染的分子生物学检测是指对寄生虫的基因和核酸进行诊断的技术,具有高度的敏感性和特异性,用于各种
寄生虫病的检测和诊断。每一种寄生虫都有其特定的核酸序列(基因片段),检测其特有的核酸序列与检测虫体具有同样的诊断价值,可以作为确诊依据。
1. 聚合酶链式反应技术
聚合酶链式反应(PCR)是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的技术。被检病原体核酸序列在PCR体系下经高温变性、低温退火和适温延伸三步循环,将单个核酸分子序列进行大量复制、扩增。为缩短PCR模板制备时间,只需要极少量的部分纯化和浓缩的样品就可进行过滤,模板制备快速有效,只需3~10个原虫就可直接应用过滤方法进行PCR检测。
2. 实时荧光定量聚合酶链式反应技术
实时荧光定量PCR通过将荧光探针或荧光色素结合至PCR反应混合物,而无需随后的凝胶电泳,在一台仪器内同时扩增靶序列和分析产物,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。
3. 经化学试剂特殊处理的棉纤维卡片技术
在过滤基质中包埋蛋白质变性剂、螯合剂和自由基捕捉剂,再收集样品并提取、纯化核酸,进行后续的PCR扩增分析。
4. 环介导等温扩增技术
环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新颖的恒温核酸扩增方法,在60℃~65℃条件下,短时间内进行核酸扩增,不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程,不依赖任何专门的仪器设备,实现高通量快速检测。
5. 基因芯片技术
采用光导原位合成或显微印刷等方法将大量特定序列的探针分子密集、有序地固定于经过相应处理的硅片、玻片、硝酸
纤维素膜等载体上,然后加入标记的待测样品,进行多元杂交,通过杂交信号的强弱及分布,来分析目的分子的有无、数量及序列,从而获得受检样品的遗传信息。
6. DNA探针技术
又称分子杂交技术,首先处理样本以获取寄生虫DNA,将DNA固定于载体上,优化探针的杂交条件和检测程序等,然后测定探针的特异性,用临床标本评价方法检测不同标本。
寄生虫感染分子生物学检查具有规模化、自动化特点,可以对多个样本进行同时检测,尤其适用于大样本的检测,较传统的病原学技术用时短,为
寄生虫病的实验诊断技术提供了有益的补充。
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