鼻腔至喉部的上呼吸道及喉以下的下呼吸道统称为呼吸道，这些部位出现的急性炎症反应称为呼吸道感染，是儿科常见的疾病之一。作为儿童的常见病与多发病，呼吸道感染的病原体却很难明确，病毒感染多为A和B型流感病毒、1～3型副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、麻疹病毒和腮腺炎病毒等，检测方法主要有病毒分离培养鉴定、血清学检测、ELISA（酶联免疫吸附试验）测定和核酸扩增等，实验室常采用间接免疫荧光法进行常见呼吸道病毒IgM抗体的快速检测以满足临床快速、准确的检测要求。

间接免疫荧光抗体法（IFA）检测基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生特异性结合，而未与抗原结合的其他非特异抗体在洗涤步骤中被去除，随后抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白发生反应，并可通过荧光显微镜进行观察。

该方法仅适用于检测人的血清。血液采集需由专业人员无菌静脉穿刺采集，离心分离上清，短时间保存可置4℃冰箱，长时间保存应置-20℃，并避免反复冻融。

1.使用前，将所有试剂平衡至室温，载玻片平衡至室温再打开。

2.样本的稀释：按1:1比例稀释血清样本，即25μl血清加入25μlPBS（磷酸盐缓冲液）中。阴阳性对照不需要稀释。

3. 用吸附剂处理稀释后的血清：将30μl稀释后的血清加入150μl吸附剂中，彻底混匀。阴阳性对照不需吸附剂处理。处理后的血清要离心10～15分钟除去沉淀，以防干扰检测。

4. 在载玻片的每孔中加15μl吸附剂处理过的血清。在一个载玻片的每孔中加入15μl不稀释的阳性对照，在另一个载玻片的每孔中加入15μl不稀释的阴性对照。

5. 将载玻片放入湿盒中，37℃温育90分钟。

6. 用PBS洗液的缓慢水流冲洗载玻片（避免直接冲入孔内）后，浸泡在PBS中并放置在水平摇床上轻轻摇动10分钟。将载玻片用蒸馏水缓慢水流冲洗（避免直接冲入孔内）。

7. 载玻片自然晾干。

8. 每孔加入15μl FITC结合物溶液（不需稀释）。

9. 将载玻片放入湿盒，37℃温育30分钟。

10. 重复7和8的洗涤步骤。

11. 加几小滴封闭介质，小心盖上盖玻片。

12. 尽快用荧光显微镜在400倍放大率下观察结果。如果不能立即观察，可将其避光放置于 2℃～8℃，不超过24小时。

每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性，通过观察荧光判断是否感染该种病毒。感染早期采集的样本检测不到IgG，IgM检测更有临床意义。IgM一般情况下仅在感染后2～3个月存在于血清中，是近期感染的一个有效标志物。对婴儿，因出生前母体的IgG可被动的传递给胎儿，故对6个月以下婴儿IgM检测是更为有效的感染标志物。通过间接免疫荧光检测不同病毒的IgM抗体，反映患者感染病毒的情况，操作相对简单，结果具有较高的特异性和敏感型。