脆性X综合征是由于FMR1基因全突变或功能丧失突变引起的人类最常见的一种遗传性智力低下疾病。FMR1 基因位于 Xq27.3, 在 5'末端的非编码区有一个(CGG)n 三核苷酸串联重复序列, 上游有 CpG岛, 是一个高度保守的基因。(CGG)n 三核苷酸串联重复序列在正常范围为5~44, 45~55为灰区, 56~200为前突变, 200 以上为全突变。CpG 岛在正常、灰区及前突变时通常低甲基化, 在全突变时则会出现高甲基化, 导致FMR1的转录受到抑制, 进而引起突触结构和功能发生变化。脆性X综合征实验诊断是指根据实验室检查所得的结果或数据，结合临床相关资料和其他辅助检查进行脆性X综合征诊断的方法，主要的检查方法为遗传学检查及分子生物学检查。

1.遗传学检查

在叶酸或胸腺嘧啶缺乏的培养条件下可见到脆性位点Xq27.3处的裂隙或随体样结构；也可用叶酸抑制剂诱导发现脆性位点，但是会出现假阳性或假阴性结果，女性携带者的假阴性率较高，需结合其他检查。

2.分子生物学检查

（1）Southern 印迹杂交：FMRl基因5’端非编码区CGG异常扩增和其上游CpG岛异常甲基化，使特异性的甲基化酶切位点无法被甲基化敏感的限制性内切酶识别。应用甲基化敏感的限制性内切酶酶切并与探针进行杂交，分析杂交后DNA片段大小，了解CGG重复次数和CpG岛甲基化程度，从而对脆性X综合征进行诊断，Southern一印迹分析是目前最主要的确诊方法。

（2）常规PCR：检测CGG的重复次数，琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物，检测脆性X染色体突变位点的CGG重复情况，及其长度多态性。常规PCR法可诊断出正常和CGG重复次数较少的前突变携带者，但CGG重复次数较多的前突变携带者和全突变患者。无法应用常规PCR法进行诊断。改良，如基因组DNA首先被甲基化敏感的限制性内切酶酶切后，再PCR检测(CGG )n 拷贝数。

(3)三核苷酸重复引物PCR(TP-PCR):实验操作简便，只需要通过一次PCR扩增，之后行1次毛细管电泳，具有超强的扩增体系，可扩增＞1300的CGG重复，对于＜200CGG重复，可以算出精确重复数，精确区分1个CGG的差异，独创“锚定引物PCR扩增，可判断出女性基因是杂合子还是纯合子，及AGG的嵌入数，灵敏度高，DNA需求量少。

(4)甲基化特异性多重连接探针扩增技术(MS-MLPA) 技术:能够同时检测FMR1基因拷贝数及其上游 CpG岛甲基化状态, 有助于对前突变、全突变样本 CpG 岛甲基化状态进行确认, 并能检出较为罕见的 FMR1 基因缺失。

脆性X综合征实验室检查的方法主要是Southern 印迹杂交目前是FMR1甲基化状态的金标准，但操作繁琐，敏感性不稳定，可能漏诊和误诊，不适于大规模人群筛查。PCR方法，包括改良的PCR方法，酶切不彻底，受高(CGG )n 含量序列影响，只能定量分析男性标本，对女性标本无法检测。

TP-PCR, 实验操作简便，可判断出女性基因是杂合子还是纯合子，及AGG的嵌入数，特异性高、敏感性强，结合MS-MLPA技术是目前主流检测方法，两者结合，还可以对胎儿进行产前检查。